Producción de flagelina recombinante para desarrollar la detección de Salmonella enteritidis basada en ELISA

MICROBIOLOGÍA MÉDICA
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Seyed Ali Mirhosseini, Abbas Ali Imani Fooladi, Jafar Amani , Hamid Sedighian
Centro de Investigación de Microbiología Aplicada, Universidad de Ciencias Médicas Baqiyatallah, Teherán, Irán
Recibido el 4 de octubre de 2015, aceptado el 4 de abril de 2016

Abstracto

Las enfermedades transmitidas por los alimentos, causadas por las bacterias patógenas, son altamente prevalentes en el mundo. Salmonella es uno de los géneros bacterianos más importantes responsables de esto. Salmonella Enteritidis (SE) es una de las Salmonella no tifoideaque se puede transmitir al ser humano a partir de productos avícolas, agua y alimentos contaminados. En los últimos años, se han desarrollado métodos de detección nuevos y rápidos como el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En este estudio, se produjo FliC recombinante (rFliC) para usar como antígeno. La inmunización se realizó en ratones con el FliC recombinante purificado (rFliC). Los ratones se inmunizaron por vía subcutánea con rFliC y provocaron anticuerpos IgG séricos específicos de rFliC significativos. Se estableció un sistema ELISA indirecto para la detección de Salmonella Enteritidis. Nuestros resultados confirmaron que la flagelina recombinante puede ser uno de los indicadores excelentes para la detección de Salmonella Enteritidis.

 

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Palabras clave
Salmonella enteritidis, Flagelina C, ELISA indirecta, Detección bacteriana, Alimentos contaminados
Introducción

La Salmonella representa un grupo de patógenos bacterianos gramnegativos importantes que causan enfermedades intestinales y sistémicas en huéspedes humanos y animales después de la ingestión de agua contaminada y alimentos tales como carne de aves de corral y huevos. 1 Aproximadamente un millón de casos de infecciones por Salmonella se informan cada año en los Estados Unidos. 2 En estudios descriptivos previos de diferentes lugares y muestras en Irán, se encontró que la prevalencia de Salmonella era del 9,2% en 272 muestras de heces y del 8% en 369 heces. En un estudio, se obtuvieron 610 muestras de niños menores de 12 años con una prevalencia del 37,5% de gastroenteritis, que también es causada por una bacteria patógena entérica importante. 3-6Se han identificado más de 2500 serotipos para Salmonella Enteritidis, sobre la base de las diferencias antigénicas en los antígenos O, H1 y H2. 7 Entre los 30 serovares de Salmonella que son responsables del 73% de los casos de salmonelosis en los Estados Unidos, Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis o Salmonella Enteritidis es un patógeno bacteriano importante y dominante. Fue una causa frecuente de salmonelosis humana y agentes causantes de enfermedades transmitidas por los alimentos en todo el mundo desde principios de los años ochenta hasta fines de los noventa. 8-10 Se han desarrollado diferentes métodos (p. Ej., Métodos convencionales, inmunológicos y de base molecular) para la detección deSalmonella . Aunque los métodos actuales basados ​​en el cultivo para la detección de Salmonella son sensibles y de bajo costo, pero al mismo tiempo consumen mucho tiempo y material y necesitan un enriquecimiento inicial. Por ejemplo, el método convencional para la detección de Salmonellae , incluida Salmonella Enteritidis, de los huevos tarda de 5 a 7 días, es laborioso e implica el aislamiento del organismo mediante el preenriquecimiento, así como procedimientos selectivos de enriquecimiento y pruebas de confirmación serológica. Este método es útil para la detección de pequeñas cantidades de Salmonella Enteritidis.

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Los métodos moleculares (PCR) son buenos pero también tienen algunas limitaciones. Para los métodos basados ​​en PCR, el patógeno necesita crecer y se requiere una alta concentración de ácido nucleico para ser extraído. 11, 12 La flagelina bacteriana es una de las proteínas de la membrana externa que desempeña muchas funciones, como movilidad, patogenicidad y adyuvanticidad, y muestra actividad de ligandos del receptor tipo toll (TLR). Es eficaz en dosis muy bajas 13,14 y se une al receptor tipo 5 (TLR 5), que está presente en las células del sistema inmunitario (células epiteliales, células dendríticas y macrófagos). Una de las proteínas de flagelina más externas es FliC, que tiene un peso molecular de 50-60kDa. 15,16 La unión de FliC con TLR5 conduce a una cascada de reacciones que da como resultado la producción de citoquinas proinflamatorias como TNF-α, IL-6 e IL-12. 17

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En este estudio, producimos flagelina recombinante (r-FliC) para la detección de SalmonellaEnteritidis (SE) mediante el uso de enzimoinmunoanálisis (ELISA) y proponen su utilidad en ELISA para la detección de Salmonella .

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